КОМПЛЕКТЪТ ЗА ПОЧИСТВАНЕ НА ДНК ЕКСТРАКТМ е проектиран за бързо и ефективно пречистване на фрагменти от ДНК след ензимни реакции.
Той ефективно премахва нуклеази, праймери, ензимни инхибитори, детергенти, рестрикционни ензими, полимерази, двувалентни йони, соли, минерално масло и др. Пречистена ДНК може да се използва общо

приложения надолу по веригата. Праймерите от PCR реакции се елиминират количествено, докато малки ДНК фрагменти са все още свързани и пречистени с високо възстановяване. Комплектът позволява пречистване на ДНК фрагменти от 50 bp до 20 kbp, както и на плазмидна и геномна ДНК. Протоколът за пречистване и буферните формулировки са оптимизирани за високи добиви и чистота на ДНК. Продуктът е предназначен само за научноизследователска употреба.
ПРИНЦИП
Процедурата за пречистване на ДНК използва спинови миниколони с мембрани, които ефективно и селективно свързват нуклеинови киселини. Първо, CB буфер се добавя към ДНК проба. Той причинява разграждане на протеините и дава възможност на ДНК да се свърже с мембраната на колоната.

Свързващият буфер съдържа цветен индикатор, който улеснява лесното наблюдение на рН на разтвора за оптимално свързване на ДНК. Двустепенният етап на измиване ефективно премахва примесите и ензимните инхибитори.
Пречистената ДНК се елуира с помощта на буфер с ниска йонна сила (буфер за елуиране) или вода (рН 7.0-9.0) и може да се използва директно във всички приложения надолу по веригата, като PCR, qPCR, секвениране на ДНК, ензимно ограничение, лигиране на ДНК и т.н. съхранява до готовност за употреба.
Елуиране на ДНК
Оптималният обем на използвания елуиращ буфер трябва да бъде избран в зависимост от количеството ДНК в пробата и до очакваната крайна концентрация на ДНК. Препоръчва се използването на 15-30 μl елуиращ буфер. От съществено значение е да се приложи елуиращ буфер точно върху центъра на мембраната. За да се постигне максимално възстановяване на ДНК, трябва да се приложат следните модификации:

Буфер за елуиране с топлина до 70 ° С, нанесете върху колоната и инкубирайте при стайна температура за 5 минути.
Извършете 2 или 3 етапа на елуиране с 15-30 μl елуиращ буфер. За да осигурите пълно възстановяване на ДНК от мембраната, използвайте 200 μl елуиращ буфер.
Елуиращ буфер
Елюиращият буфер не съдържа EDTA, който може да попречи на някои ензимни реакции.

мониторинг на рН
CB Buffer съдържа индикатор, който позволява мониторинг на рН. Жълтото показва, че рН на разтвора е по -ниско от 7,0 и
гарантира оптимално свързване на ДНК с мембраната. Когато рН е по -високо от 7,0, разтворът става розов. Обикновено се случва, когато рН на ДНК пробата значително се различава от стандартните параметри на операциите за третиране на ДНК (рН> 9,0). В този случай е от съществено значение да се добавят 10 μl 3 М натриев ацетат (рН 5,2). Това ще понижи рН, което ще позволи на разтвора да се свърже ефективно с мембраната на миниколоната.

Зареждане на буфер
Зареждащият буфер е предвиден за анализ на пречистени ДНК проби с използване на гел електрофореза. Зареждащият буфер съдържа 3 багрила (бромофенолово синьо, ксилен цианол и оранжево G). Зареждащият буфер се концентрира с коефициент шест, като по този начин, за да се получат най -задоволителните резултати, смесете 2 μl зареждащ буфер с 10 μl пречистена ДНК.